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卵磷脂吐温80营养琼脂生产厂家

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卵磷脂吐温80营养琼脂澳门永利网站优势及特点:

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卵磷脂吐温80营养琼脂澳门永利网站参数:

英文名称:Lecithin Tween 80 Nutrient Agar

澳门永利网站规格:250g

澳门永利网站编号:HP1313

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卵磷脂吐温80营养琼脂进行T细胞培养的相关操作步骤:

1.准备新鲜的外周血单个核细胞(PBMC);或根据标准的外周血单个核细胞解冻程序,在37°C的水浴,快速解冻(<1分钟)冷冻小瓶的外周血单个核细胞

2.用生理盐水洗涤细胞,根据需要也可加入2~5%的热灭活的的人自体血浆。

3.计数细胞可以使用电子(即Coulter计数器,VI-细胞)或手动的方法(即血球计数仪)。

4.离心细胞,清除洗涤缓冲液。

5.培养初期,用含细胞因子(如IL-2)的培养基重悬PBMC;CD3+ T细胞密度保持在大约0.5-1×106/ mL。转移细胞到相应的细胞培养容器(培养袋、培养瓶)。随后可应用各种操作激活T细胞,包括添加刺激的抗体或抗原抗原呈递细胞。无论培养T细胞的规模大小,细胞均可被隔离,激活和扩大。

6.在37℃,5%CO2的潮湿培养箱。在潮湿的气氛中,在37°C,5%CO2孵育培养容器。在对数生长期细胞,需要维持细胞所需的浓度。为了保持细胞指数生长期,当细胞密度超过1×106/ mL时,需要分离传代,维持细胞密度在0.5-1×106/ mL(例如,2×106个细胞/ mL以上,按1:4比例0.5×106细胞/ mL)。在静态平板培养中为了获得最佳的气体交换,建议培养基深度不超过1到1.2厘米。

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卵磷脂吐温80营养琼脂进行CIK细胞培养的相关操作步骤:

1.采集健康人外周血,肝素抗凝,以Ficoll Hypaque淋巴细胞分离液分离获得单个核细胞(MNC)。

2.用免疫细胞无血清培养基漂洗3次,调节细胞密度为1×106cells/mL。

3.贴壁培养2h,收集悬浮细胞用免疫细胞无血清培养基调节细胞密度为1×106cells/mL。

4.加入rhIFNγ(终浓度为2000U/ml),放置37℃,5% CO2孵育箱中培养24h。

5.加入rhIL2(终浓度为1000U/ml)和CD3McAb(终浓度为100ng/mL),放置37℃,5% CO2孵育箱中继续培养。

6.以后每隔2-3d半量换液,用含有rhIL2(终浓度为1000U/ml)的免疫细胞无血清培养基换液。

7.一般来说在细胞培养至第15d左右时,即诱导成为CIK细胞。

温馨提示:以上过程作为常规免疫细胞培养的一般准则,如需在生物反应器或培养袋高密度培养,应优化条件来确定最佳的操作步骤。

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缓冲蛋白胨水(BPW) Buffered Peptone Water

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强化梭菌鉴别琼脂(DRCA)

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葡萄糖肉浸液肉汤 Dextrose Meat Infusion Broth

溶血(0.1%)赫氏琼脂

改良Y培养基

0.1%蛋白胨水 0.1%Peptone W

H199

HE琼脂(HE) Hekton Enteric Agar

亮绿乳糖培养基 Brilliant Green Lactose Medium

莫匹罗星锂盐改良MRS培养基 Li Mupirocin Modified MRS Agar

三糖铁琼脂(TSI)

赖氨酸铁琼脂 Lysine Iron Agar

厌氧菌琼脂

氯化钠蔗糖琼脂 Sodium Chloride Sucrose Agar

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